分枝桿菌屬通用PCR試劑盒

產(chǎn)品內(nèi)容：

注意：1、引物干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入 110uL 的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。

2、為避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供專一的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

儲(chǔ)存條件及有效期：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 24 個(gè)月。

自備試劑：

樣品 DNA

1.如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取反應(yīng)，多出的兩個(gè)中一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用試劑盒提供的PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E4 拷貝/μL，本試劑盒提供）10μL 加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照（加水后其總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始  樣品體積一樣）。可以直接用水作為制備的陰性對(duì)照。

2.用自選方法純化上述 N+2 個(gè)樣品的 DNA。本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品DNA-提取試劑盒兼容。也可以選用本公司的相關(guān)的核酸-提取試劑盒。

應(yīng)用范圍：

常規(guī)PCR；T/A克隆；菌落PCR鑒定。

PCR過(guò)程：

1.變性

當(dāng)反應(yīng)混合物加熱0.5至2分鐘至94°C時(shí)，發(fā)生變性。

由于 DNA 兩條鏈之間的氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。

單條 DNA鏈現(xiàn)在充當(dāng)合成其他 DNA鏈的模板。

2.退火

持續(xù)約20至40秒，反應(yīng)溫度降至54至60℃。

在這種情況下，引物附著在模板 DNA的互補(bǔ)序列上。

引物序列是20-30個(gè)堿基長(zhǎng)的單鏈 DNA或RNA片段。

它們充當(dāng) DNA生產(chǎn)的前體。

有兩個(gè)引物-正向引物和反向引物一一兩條分離的鏈以相反的方向延伸。

3.延伸

在此階段溫度升高至72至80攝氏度之間。

Taq聚合酶將堿基固定到引物的3'未端。結(jié)果,DNA從5'延伸至3'。

Taq聚合酶可以承受極-高的溫度。結(jié)果產(chǎn)生雙鏈DNA分子。

為了在短時(shí)間內(nèi)獲得多個(gè)感興趣的 DNA序列，這三個(gè)過(guò)程需要進(jìn)行20-40次。

產(chǎn)品推薦：